設(shè)置熒光分光光度計(jì)的狹縫要注意哪些事項(xiàng)
熒光分光光度計(jì)是用來掃描液相熒光標(biāo)記物熒光光譜的儀器。它可以提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振度等物理參數(shù)。通過這些參數(shù)的確定,不僅可以進(jìn)行般的定量分析,而且可以推斷分子在各種環(huán)境中的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長掃描范圍般為190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍為200~800nm。它可用于液體和固體樣品的光譜掃描,如凝膠條。
許多因素,如溶液的厚度、熒光強(qiáng)度等,都與溶液的厚度、熒光強(qiáng)度等因素有關(guān)。然而,熒光強(qiáng)度的峰值位置很容易確定,可以用來確定什么樣的物質(zhì)。熒光定量分析必須確定些條件。
狹縫的大小對熒光強(qiáng)度非常重要。狹縫的大小可以根據(jù)你測量的物質(zhì)的熒光強(qiáng)度來調(diào)整。在相同濃度下,如果熒光強(qiáng)度過高,超過儀器的量程,可以減小狹縫。然而,需要指出的是,熒光強(qiáng)度不僅受狹縫尺寸的影響,還受分辨率的影響。對于熒光掃描,增加狹縫可以提高熒光強(qiáng)度和重現(xiàn)性,但分辨率會(huì)降低。分辨率由狹縫決定,當(dāng)儀器其他結(jié)構(gòu)固定時(shí),分辨率由狹縫尺寸決定(光柵線數(shù)、焦距和綜合線性色散系數(shù))。在實(shí)際應(yīng)用中,狹縫尺寸應(yīng)與測量峰的半峰寬相匹配。如果太大,峰會(huì)變形。它也決定了狹縫的大小。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值,如果狹縫擴(kuò)大倍,光通量將增加4倍。