如何選擇熒光分光光度計的濾光片?
熒光分光光度計在使用時,需要注意開機次序,以保護設備之間不受影響。熒光光譜儀開機順序一般為先開氙燈,然后開儀器主機,后開跟儀器連接的計算機。如此操作的原因在于穩態氙燈是高壓點亮,為了避免瞬問脈沖電流對周圍設備造成影響,需要先開氙燈,等電流穩定后再打開周邊的電腦等設備。關機順序則相反。熒光定量分析多采用工作曲線法,即以已知量的標準物質,按試樣相同方法處理后,配成一系列標準溶液,測定其相對熒光強度和空白溶液的相對熒光強度;扣除空白值后,以熒光強度為縱坐標,標準溶液濃度為橫坐標,繪制工作曲線;然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液,在同一條件下測定其相對熒光強度,扣除空白值后,從工作曲線上求出熒光物質的含量。
在進行發射圖譜掃描分析時,根據斯托克斯定律,設置的激發波長要比發射波長短,例如,激發波長λex=260nm,則發射起始波長應該從大于260nm的波長開始,比如270nm,發射結束波長為870nm。這樣一來,在激發光的2倍波長(520nm)、3倍波長(780nm)處都會出現激發波長的尖銳的倍頻峰,若與熒光光譜峰重疊,將會對測試產生干擾,需選用合適的濾光片將其濾掉。