無論光度計,色度計或分光光度計,基本結構原理都是類似的。它們由光源,單色器,狹縫,吸收杯和檢測器系統組成。
、光源
良好的光源需要高發光強度,明亮穩定,光譜范圍寬,使用壽命長等優點。幾乎所有的光度計都使用調節鎢絲燈(鎢燈)。 它適合在340-900nm光源范圍內使用。更先進的可見分光光度計加上穩壓氫燈(氫燈)。 適用于對光源進行200-360nm紫外光譜分析。
二、單色光器
分光光度法測定物質的吸光度需要在特定波長下進行。單色器的效果是根據需要選擇特定波長范圍的單色光。在實際工作中難以選擇單波長的光。所謂的單色光是指在該波長下以及在發射方面較少能量的相鄰長和較短波長范圍內的大發射。單色光的波長范圍越窄,儀器的靈敏度越高,測量結果就越可靠。
簡單的單色光是在光電比色計上使用的濾光器(玻璃的某種顏色)。由于光譜范圍較寬,因此光電色度計的分辨率較差,但對比度顏色分析仍可以得到更令人滿意的結果。棱鏡衍射光柵是種好的單色儀。它們可以在寬光譜范圍內分離相對單的波長。
三、狹縫
通過單色儀發射的光的強度可能太強或太弱以促進進步的檢測。狹縫是由光路上的對擋板形成的狹縫。通過調節狹縫的大小來調節入射單色光強度和入射光以形成平行光以滿足檢測器的需要。光電比色計的狹縫是固定的,上海精科光度計和上海精科可見分光光度計的狹縫尺寸是可調的。
四、吸收杯
吸光杯也稱為樣品杯,光度測量系統是重要的部分之。在可見光范圍內測量使用光學玻璃吸收杯,在紫外范圍內測量使用石英吸收杯。注意保護吸收杯的質量是獲得良好分析結果的重要條件之。要使用粗糙的硬質材料接觸吸杯,不能用手指抓住杯子的光學表面的吸收; 用后用水沖洗,不要離開測定液體,特別是蛋白質和核酸溶液。
五、檢測器系統
諸如硒光伏電池,光電管或光電倍增管的光伏元件通常用作光接收器,以將通過吸收杯的光的能量轉換為電能。 然后進步使用適當的方法來測量產生的電流。 帶有硒光伏電池的光電比色計用于接收器。 硒光伏電池具有低的光靈敏度。 它不能檢測非常弱的光的強度。 并且對波長為270nm以下和700nm以上的光波不敏感。
更復雜的分光光度計是真空光電管或光電倍增管作為接收器,并使用放大器件來提高靈敏度。盡管窄單色光能量的光譜比寬范圍弱得多,但是具有靈敏檢測系統的該放大電路仍然可以被精確地檢測。
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